Vraag:
Wat is de reden achter het kiezen van het reportergen bij het experimenteren met uw gen van interesse?
Kyra
2011-12-15 03:29:10 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Ik merkte in voorbeeldexperimenten in de klas dat verschillende reportergenen worden gekozen om te worden ingevoegd in de buurt van uw gen van belang om te bewijzen of het gen wel of niet tot expressie wordt gebracht. U kunt bijvoorbeeld het gen voor fluorescentie invoegen naast uw gen van belang, zodat u weet of het wordt getranscribeerd of niet door of de cellen van het organisme fluorescerend zijn en in welke mate ze fluoresceren.

Ik heb het merkte in sommige experimenten met meerdere versies op dat ze in het ene geval het fluorescerende gen gebruiken en in het andere een ander gen (bijvoorbeeld lactose). Beide delen van het experiment gebruiken bijna exact dezelfde stappen, dus waarom zouden ze niet hetzelfde reportergen kiezen?

Hier al goede antwoorden. Trouwens, ik houd een [blog over reportergenen] (http://www.reportergene.com/p/what-makes-me-blogging.html) als je geïnteresseerd bent.
Drie antwoorden:
#1
+13
Aleadam
2011-12-15 03:45:01 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Verschillende genen zullen verschillende doelen dienen. Als u bijvoorbeeld colocalisatiestudies wilt uitvoeren, dan zijn fluorescerende genen zoals eGFP en DS-Red (of enige variatie daarvan, namelijk Emerald, mCherry, enz.), Heel nuttig, aangezien u verschillende filters op uw microscoop kunt gebruiken voor de verschillende fluoroforen. Voor morfologische beoordelingen is misschien een LacZ-gen of alkalische fosfatase beter geschikt, aangezien de detectie van deze enzymen compatibel is met standaard histologische technieken en je meestal een veel beter contrast krijgt dan met fluorescentie. Voor kwantificatiedoeleinden zou je waarschijnlijk vuurvliegluciferase of CAT gebruiken, aangezien er zeer goede kwantitatieve testen zijn voor deze enzymen.

De beslissing zal ook afhangen van de mate van ervaring van het laboratorium met elke detectietechniek en zelfs van de beschikbaarheid van de constructen. Als er al een reporter is gemaakt door het naastgelegen laboratorium en als het aan uw behoeften voldoet, gebruikt u deze gewoon, in plaats van uw eigen te maken, zelfs als het reporter-gen niet uw eerste keuze zou zijn geweest.

#2
+1
user560
2012-04-18 20:48:00 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Reportergenen worden ook gebruikt wanneer het experiment probeert het effect te onderscheiden van dat gen dat de wetenschapper introduceert (exogeen) en hetzelfde gen dat de cel al heeft (endogeen). Idealiter zou men een celsysteem willen kiezen dat vanwege dit verstorende effect geen endogene genen bevat die van belang zijn, maar het is niet altijd haalbaar.

Reportergenen worden ook voornamelijk gebruikt wanneer het onmogelijk of zeer moeilijk om een ​​gen van belang direct te meten, vooral als het gen relatief onduidelijk is in de wetenschappelijke literatuur. Cellen die geen thymidinekinasegen tot expressie brengen, zijn bijvoorbeeld onmogelijk te visualiseren met Positron Emission Tomography. Het is niet omdat er iets mis is met het gen in kwestie, alleen dat de cellen een manier nodig hebben om een ​​radioactief middel vast te houden dat kan worden gedetecteerd door de PET-machine. Evenzo worden fluorescerende genen heel vaak gebruikt omdat het vaak nodig is om te zien waar het genproduct zich in de cel bevindt, en de enige manier om dat te doen is door het te combineren met iets dat zichtbaar is door microscopie, waardoor je fluorescentie en de cel kunt zien. structuren. Ten slotte wordt een reportergen vaak gebruikt wanneer het gen van interesse moeilijk te detecteren is vanwege beperkingen van commerciële antilichamen of detectiekits, en de reporter, die zeer vaak wordt gebruikt, is gemakkelijk te detecteren met commerciële producten en antilichamen.

#3
-2
krushna
2013-12-16 11:21:05 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Reportergenen zijn een instrument van onschatbare waarde geworden in studies naar genexpressie. Een gen bestaat uit twee functionele delen: een is een DNA-sequentie die de informatie geeft over het eiwit dat wordt geproduceerd (coderende regio). Het andere deel is een specifieke DNA-sequentie die is gekoppeld aan het coderende gebied; het reguleert de transcriptie van het gen (promotor). De promotor activeert of onderdrukt de expressie van het gen. Het doel van de reportergen-test is om het regulerend potentieel van een onbekende DNA-sequentie te meten. laat weten wat het precies doet.

Dit antwoord gaat in op wat een reportergen is, maar het lijkt erop dat het OP dat al weet. Het OP vraagt ​​eigenlijk waarom u een bepaald reportergen in een bepaalde context zou gebruiken. Als je meer inzicht hebt in * deze * vraag die nog niet in de twee bovenstaande berichten is opgenomen, herzie dan je antwoord.


Deze Q&A is automatisch vertaald vanuit de Engelse taal.De originele inhoud is beschikbaar op stackexchange, waarvoor we bedanken voor de cc by-sa 3.0-licentie waaronder het wordt gedistribueerd.
Loading...